Page 207 - Егоровские чтения

ние информации об антигенных детерминантах нативного белка яв­
ляется важной стадией для решения комплекса теоретических и
прикладных задач биохимических исследований.
Антигенная структура изофермента С пероксидазы хрена прак­
тически не исследована и выявление антигенных детерминант фер­
мента является важным как с точки зрения получения и практичес­
кого применения направленных антител, так и для уточнения тре­
тичной структуры фермента, особенно его активного центра.
Целью данной работы явилось исследование антигенной структу­
ры молекулы пероксидазы хрена (изофермент С) на основе примене­
ния метода пептидного сканирования белков и использования монок­
лональных антител, направленных к пероксидазе хрена.

ЕАнтигенное сканирование пероксидазы хрена (изофермент С).
Для определения линейных антигенных детерминант изофермен­
та С пероксидазы хрена методом активированных эфиров были син­
тезированы 303 перекрывающихся гексапептидных фрагмента (с
шагом в один аминокислотный остаток) первичной структуры этого
белка и с помощью иммуноферментного анализа изучено их взаимо­
действие с кроличьими поликлональными антисыворотками против
пероксидазы хрена (Аммосова и др., 1997).
Антигенное картирование пероксидазы хрена было проведено с
помощью антисывороток, полученных от трех кроликов. Результаты
связывания антител с набором гексапептидов представлены в виде
характеристического спектра, по оси абсцисс которого отложены но­
мера пептидов, а по оси ординат - значения оптической плотности,
пропорциональные концентрации антител, связавшихся с соответ­
ствующими пептидами.
На рис. 1 представлены результаты связывания антисыворотки К
2060 (второй цикл иммунизации) в разведениях 1:750 и 1:2000 с гек­
сапептидами, перекрывающими последовательность изофермента С
пероксидазы хрена. Антитела контрольной сыворотки, тестирован­
ной в тех же разведениях, не связывались с гексапептидами.
Данные для разведений антисыворотки К 2060 (от 1:1000 до 1:2000)
были использованы для составления перечня пептидов (табл. 1).
При сравнении характеристических спектров 3-х антисывороток
было установлено, что две антисыворотки в одинаковом разведении
выявляют одни и те же 15 основных пептидов в качестве антигенных
детерминант, а третья антисыворотка определяет 13 пептидов из
числа выявленных двумя другими антисыворотками. Таким образом,
метод пептидного сканирования позволяет выявить участки поли-
пептидной цепи, которые можно идентифицировать как линейные
антигенные детерминанты.
203