Page 212 - Егоровские чтения

другом за взаимодействие с антигеном, то есть реагирующие с анти­
геном независимо, могут быть использованы в амплифицированном
методе ИФА по типу “пероксидаза-антипероксидаза”. Эта система
используется в непрямом конкурентном иммунологическом анализе
для количественного определения малых количеств антигена. В ка­
честве модельной системы для такой модификации ИФА для опре­
деления инсулина были использованы мАт к инсулину свиньи, кон­
курирующие с инсулином в растворе и иммобилизованным на плаш­
ке. В этом варианте были использованы монАт типа 9F и 2С, которые
связывались с пероксидазой независимо. Использование метода “пе­
роксидаза-антипероксидаза” позволило увеличить чувствитель­
ность метода определения инсулина и детектировать его в концен­
трации до 350 пкг/мл.
Другие антитела, например, 7G и 2С конкурируют как с монАт 9F,
4D, ЗЕ, так и друг с другом, проявляя таким образом либо свою тож­
дественность, либо то, что их антигенные детерминанты находятся в
непосредственной близости и, возможно, перекрываются. Нельзя с
уверенностью утверждать, что эпитопы остальных конкурирующих
за связывание с пероксидазой антител находятся достаточно близко
друг от друга в пространстве - ведь размеры иммуноглобулинов пре­
восходят размеры молекулы пероксидазы хрена почти в четыре раза.
Моноклональные антитела типа РОП ЗЕ и 9F реагировали с апо­
ферментом, связывались с денатурированным холоферментом в им-
муноблотинге, проведенном после SDS-электрофореза, и реагирова­
ли в ИФА с рекомбинантной апо- и холопероксидазой, экспрессиро­
ванной в клетках E.coli. Таким образом, можно с большой степенью
вероятности предположить, что эти три клона антител направлены к
линейным эпитопам.
Таблица 3
Свойства монАт к пероксидазе хрена
Подкласс Взамодействие с Изоформы ПХ,
Клон иммуно­ Кд Взаимодействие рекомбинант, взаим. с монАт
с апо-ПХ
глобул. пероксидаз.
2С IgGi 2’10 "M - - щелочные
ЗЕ IgGj 2*109M + + щелочные
(Ким. 1990)
4D IgGi не опред. - - щелочные
7G IgGr 1,5*109 M - - щелочные
(Ким,1990)
9D IgGj 3.7*10'”М - + щелочные
9F IgGi 1,5*10’М + 4- щелочные
POj IgG, не опред. + не опред. щелочные
РОг IgG, не опред. не опред. не опред. щелочные
4F IgGr не опред. не опред. не опред. кислые
6В IgG, не опред. не опред. не опред. кислые

208