Page 213 - Егоровские чтения

Остальные монАт не связывались с апоферментом в ИФА. Это
свойство полученных антител позволило провести аффинную очист­
ку кислых и щелочных изоферментов в одну стадию.
Так, например, препарат пероксидазы из корней хрена фирмы
Reanal (Венгрия) с RZ 0,36 был очищен на колонке с антителами 9D
(носитель-СН-активированная сефароза) до RZ 3,15, что соответ­
ствует такому показателю для щелочных форм пероксидазы. Эти
монАт не взаимодействовали с денатурированной пероксидазой, не
связывались с апоферментом и рекомбинантной пероксидазой в
ИФА и направлены, скорее всего, против конформационных детер­
минант.
Свойства монАт, направленных к пероксидазе хрена, суммирова­
ны и представлены в табл. 3.
бЛокализация эпитопов, взаимодействующих с моноклональными
антителами 9F и POj на поверхности молекулы.
На синтезированных пептидах были протестированы монокло­
нальные антитела POj (в концентрациях 5 и 1 мкг/мл) и 9F (в концен­
трациях 15 и 2 мкг/мл). Антитела гомогенны и имеют изоэлектричес­
кие точки: для антител 9F р! 7.2, для РСЦ - р! 6.5. Оба клона направ­
лены к перекрывающимся линейным детерминантам, которые нахо­
дятся в одной области (аминокислотные остатки 261-268). Эпитопом
для антител РО, является пептид с аминокислотного остатка 263 по
аминокислотный остаток 268 (VRSFAN). Эпитопом для антител 9 F
является пептид с номерами аминокислотных остатков 261-266
(PLVRSF). С антителами 9 F взаимодействовал также пептид 120-125
(PLGRRD). Надо отметить, что последовательности 261-266 и 120-
125 имеют некоторое сходство - аминокислотные остатки PL-R, воз­
можно, что наличие данной последовательности послужило причи­
ной реактивности этих пептидов с антителами 9F.

Аммосова Т.Н., Упоров И.В., Рубцова М.Ю., Игнатенко О.В., Егоров А.М., Колеса-
нова Е.Ф., Арчаков А.И. // Биохимия. - 1997. - Т. 62. - № 4; Ким Б.Б. Дисс. канд. хим.
наук - М.: МГУ, 1990; Чередникова Т.В., Аммосова Т.Н., Титова Н.А., Егоров А.М. //
Биотехнология. - 1994. - № 2; Gajhede М., Schuller D.J., Henriksen A., Smith А.Т. and
Poulos T.L. // Nature Structural Biology. - 1997; Geysen H.M., Tainer J.A., Rodda S.J.,
Mason T.J., Alexander H., Getzoff E.D., Lerner R.A. // Science. - 1987. - V. 235; Tan, X.,
Ratnam, M., Huang, S., Smith, P.L. and Freisheim, J.H. // J. Biol. Chem. - 1990. - V. 265;

8 Заказ № 34
209